Test ELISA zisťuje množstvo chorôb, a preto sa široko používa v medicíne a ďalších. Test ELISA je však najznámejší pre diagnózu lymskej boreliózy. Čo je test ELISA? Ako interpretovať výsledky? Aká je cena testu?

Obsah:

  1. ELISA test – čo zistí? Použitie ELISA
  2. ELISA test – čo je to test?
  3. ELISA test a lymská borelióza – kedy vykonať?
  4. ELISA test - cena. Koľko stojí test ELISA?
  5. ELISA test – výsledky. Môžu byť falošne pozitívne?
  6. ELISA test – výsledky. Môžu byť falošne negatívne?

ELISA test , t.j. enzýmová imunoanalýza, je bežne používaná laboratórna metóda, ktorá slúži okrem iného na kvantitatívnu detekciu protilátok v krvi

Vďaka tomuELISA testnájdenýaplikáciav diagnostike bakteriálnych ochorení, ako jeLymská choroba s Lyme.

Výhodou metódy ELISA je jej jednoduchosť, rýchle prevedenie a vysoká citlivosť. Metóda ELISA sa vykonáva pomocou špeciálnych plastových doštičiek s jamkami naplnenými napr. boréliovými proteínmi (antigénmi) a špecifickými monoklonálnymi protilátkami, ktoré sú určené na detekciu protilátok vo vzorke pacienta.

ELISA test – čo zistí? Použitie ELISA

Vysoká citlivosť a jednoduchosť metódy ELISA ju predurčila na použitie v diagnostike mnohých chorôb, no najznámejšia je ako diagnostická metóda lymskej boreliózy.

Pri diagnostike lymskej boreliózy, tzv nepriama ELISA, ktorá umožňuje detegovať špecifické IgM alebo IgG v testovanom materiáli. Rovnakým spôsobom môžu byť protilátky detekované na diagnostické účely:

  • vírusové infekcie: herpes vírusy (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovírus), HIV, vírusy hepatitídy (HBV a HCV)
  • protozoálne infekcie: toxoplazmóza, giardiáza
  • autoimunitné ochorenia: celiakia (anti-tTG alebo anti-DPG protilátky), Hashimotova choroba (anti-TG a anti-TPO protilátky), zápalové ochorenia čriev (anti-ASCA a anti-ANCA protilátky)
  • parazitárne ochorenia a alergie,v ktorých sa zisťujú špecifické IgE protilátky. Ich zvýšená hladina môže naznačovať prítomnosť alergií, napr. na peľ a potraviny, alebo invázie parazitov (pásomnica ozbrojená, škrkavka ľudská)

Existujú aj modifikácie metódy ELISA (tzv. sandwich ELISA), ktoré umožňujú v testovanej vzorke detekovať aj iné bielkoviny ako protilátky. Potom je cieľom výskumu zistiť v biologickom materiáli:

  • fragmenty vírusov alebo baktérií, najčastejšie sú to antigény špecifické pre daný patogén
  • sérové ​​hormóny, napr. estrogén, prolaktín, TSH, fT4, kortizol
  • enzýmy, napr. kalprotektín, pankreatická elastáza, alkalická fosfatáza
  • nádorové markery, napr. CA-125
  • prítomnosť drog v sére

Táto metóda sa používa aj v potravinárskom priemysle, kde je možné zistiť stopové množstvá alergénov (napr. mlieko, arašidy), GMO alebo toxínov v potravinách.

ELISA test – čo je to za test?

Diagnóza napr.lymskej boreliózy metódou ELISA spočíva v detekcii imunitných proteínov v biologickom materiáli - protilátok, ktoré vznikajú pri odpovedi proti boréliovým antigénom

Protilátky sa testujú v dvoch triedach, IgM a IgG. IgM sú prvé protilátky, ktoré sa objavia v tele pri kontakte s baktériami a časom klesajú.

Ich miesto vystriedajú perzistentnejšie IgG protilátky, ktoré môžu v tele zostať niekoľko desiatok rokov.

Týmto spôsobom sa nepriamo testuje prítomnosť baktérií v tele detekciou protilátok špecificky namierených proti spirochétam Borrelia.

Protilátky v rôznych štádiách infekcie môžu byť namierené proti rôznym boréliovým proteínom. Napríklad v ranom štádiu je to proteín p41.

V neskorších štádiách sa začína objavovať stále viac bielkovín, ako napríklad p21, p30, p39, p43. Preto je diagnostika lymskej boreliózy mimoriadne ťažká.

Výber bakteriálnych proteínov je mimoriadne dôležitý, aby mal test vysokú diagnostickú hodnotu. Preto by sa pri diagnostike lymskej boreliózy mali bežne používať testy ELISA II. alebo III. generácie, pri ktorých sa súbory proteínov vyberú tak, aby sa dosiahol čo najspoľahlivejší výsledok.

ELISA test a lymská borelióza. Kedy vystúpiť?

Lymská borelióza je bakteriálne ochorenie spôsobené baktériou Borrelia burgdorferi a jej mnohými odrodami.

Diagnostika ochorenia nie je jednoduchá kvôli zložitosti imunitnej odpovede proti boréliám a nedokonalosti laboratórnych metód

Najpoužívanejšou laboratórnou metódou je vysoko citlivá metóda ELISA, ktorá zisťuje špecifické protilátky proti bakteriálnym proteínom.

V diagnostike lymskej boreliózy sa používa nepriama metóda ELISA, pri ktorej sa rozlišujú tieto štádiá:

  • inkubácia jamiek na platni s materiálom odobratým od pacienta, napr. Ak sú v testovanom materiáli protilátky proti boréliám, viažu sa na proteíny na dne reakčnej jamky
  • následne sa prebytočné sérum vypláchne špeciálnou umývacou kvapalinou (pufrom) a tzv. konjugát, t.j. protilátka spojená s enzýmom, ktorý sa viaže na predtým spojené protilátky v reakčných jamkách
  • Substrát pre konjugát sa pridá neskôr a nedochádza k žiadnej (pozitívnej) alebo žiadnej farebnej reakcii (negatívna)
  • posledným krokom je odčítanie koncentrácie protilátok proti boréliám v sére pacienta čítačkou (spektrofotometrom)

Metóda ELISA na lymskú boreliózu sa vykonáva s krvou av prípade neurologických symptómov (neuroborelióza) aj s likvorom

Synoviálna tekutina by sa nemala testovať, pretože existuje vysoká pravdepodobnosť falošne pozitívnych výsledkov.

Základom diagnostiky ochorenia sú klinické príznaky, ktoré na to poukazujú, potvrdené výsledkami laboratórnych testov

Pridanie výsledku laboratórneho testu bez prítomnosti symptómov neoprávňuje na diagnostiku lymskej boreliózy, keďže sa ukázalo, že protilátky proti spirochétam Borrelia sa detegujú aj u zdravých ľudí

Sérologická diagnostika lymskej boreliózy začína semikvantitatívnym skríningovým testom ELISA. Ak je výsledok negatívny, znamená to, že neboli zistené žiadne spirochéty Borrelia alebo je výsledok falošne negatívny.

Ak je výsledok pozitívny alebo slabo pozitívny (nejednoznačný), konfirmačný test Western blot, ktorý je vysoko špecifický.

Toto slúži na potvrdenie „pravdivosti“ výsledkov získaných metódou ELISA. Počas diagnostiky nemôžete preskočiť žiadny z vyššie uvedených krokov a napríklad vykonať diagnostiku pomocou metódy Western blot alebo stanoviť diagnózu na základe pozitívneho výsledku iba pomocou metódy ELISA

V Poľsku diagnóza lymskej boreliózy veľmi často končí v prvom štádiu skríningu, čo spôsobuje nesprávnu interpretáciu pozitívnych alebo slabo pozitívnych výsledkov.

Stojí za to vedieť

ELISA test - cena. Koľko stojí test ELISA?

Test stojí okolo 60zlotých a robí sa hneď. Na výsledky odporúčania si však môžete počkať približne tri mesiace.

ELISA test – výsledky. Môžu byť falošne pozitívne?

Falošne pozitívne výsledky sú výsledkom skríženej reaktivity IgM protilátok s inými proteínmi. Protilátky produkované telom môžu „nesprávne“ rozpoznať antigén iných mikroorganizmov ako boréliový antigén.

Najčastejšie „chyby“ sa vyskytujú u ľudí infikovaných treponema pallidum, herpes vírusmi a u ľudí so systémovým lupus erythematosus a inými reumatickými ochoreniami.

ELISA test – výsledky. Môžu byť falošne negatívne?

Falošne negatívne výsledky sa môžu objaviť v počiatočnom štádiu infekcie, potom by sa mal test zopakovať asi po 3-4 týždňoch. Toto sa volá sérologické okno, t.j. počiatočné obdobie infekcie, v ktorom telo ešte „nestihlo“ produkovať špecifické protilátky.

Podobne u ľudí s oslabenou imunitou, ktorí si nevytvárajú dostatok protilátok.

Veľkým problémom, najmä pri veľmi intenzívnych infekciách, je vznik tzv imunitné komplexy, ktoré pozostávajú z antigénov Borrelia spirochét a špecifických protilátok pre ne.

To robí protilátky "neviditeľnými" pre bežne používané metódy, ako je ELISA, a hoci sú prítomné v testovanom materiáli, nemožno ich detegovať.

V takýchto prípadoch môže laboratórium využiť odbúravanie imunitných komplexov. Táto liečba je navrhnutá tak, aby uvoľňovala protilátky. Táto metóda však nie je široko používaná z dôvodu nedostatočnej štandardizácie v laboratóriách.

Stojí za to vedieť

Prečo nie je diagnostika lymskej boreliózy jednoduchá?

Je to spôsobené komplexnosťou imunitnej odpovede proti boréliám a obmedzeniami laboratórnych metód. Rôznorodosť odrôd a vznik nových infekcií spôsobujúcich infekcie, najmä na európskom kontinente, neuľahčuje vývoj účinných diagnostických metód

V Európe sa nedávno objavili ďalšie odrody, ako napríklad Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana a Borrelia spielmanii. Okrem toho sa v tele môžu spirochéty borélií zmeniť na cysty alebo zostať na miestach tela, ktoré sú pre bunky imunitného systému nedostupné.

Byť tak „neviditeľný“ pre imunitný systém. Okrem toho sa ukázalo, že tkanivá môžu obsahovať fragmenty baktérií, ktoré majú silne prozápalové vlastnosti. Verí sa, že sú zodpovedné za chronické symptómy lymskej boreliózy, a to aj napriek negatívnym výsledkom štúdielaboratórium.

Referencie

1. Witecka-Knysz E. et al. Lymská borelióza: prečo je diagnostika taká ťažká? Laboratórny diagnostik apríl 2007.2. Moore A. a kol., Súčasné usmernenia, bežné klinické úskalia a budúce pokyny pre laboratórnu diagnostiku lymskej boreliózy, Spojené štáty americké. Emerg Infect Dis. júla 2016, 22. (7) .3. Laboratórna diagnostika chorôb prenášaných kliešťami.Odporúčania pracovnej skupiny: Národná komora laboratórnych diagnostikov, Štátny ústav verejného zdravotníctva-Národný ústav hygieny, Národný konzultant v oblasti infekčných chorôb, Katedra infekčných chorôb a neuroinfekcií LFUK Białystok, Poľská virologická spoločnosť, Varšava 2014. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) od A po Z. Springer 2022.

O autoroviKarolina Karabin, MD, PhD, molekulárna biologička, laboratórna diagnostika, Cambridge Diagnostics PolskaPovolaním biológ so špecializáciou na mikrobiológiu a laboratórny diagnostik s viac ako 10-ročnou praxou v laboratórnych prácach. Absolvent Vysokej školy molekulárnej medicíny a člen Poľskej spoločnosti humánnej genetiky Vedúci výskumných grantov v Laboratóriu molekulárnej diagnostiky na Katedre hematológie, onkológie a vnútorných chorôb Lekárskej univerzity vo Varšave. Titul doktora lekárskych vied v odbore lekárska biológia obhájila na 1. lekárskej fakulte Lekárskej univerzity vo Varšave. Autor mnohých vedeckých a populárno-náučných prác z oblasti laboratórnej diagnostiky, molekulárnej biológie a výživy. Denne ako špecialista v oblasti laboratórnej diagnostiky vedie obsahové oddelenie v Cambridge Diagnostics Polska a spolupracuje s tímom nutričných špecialistov na CD Dietary Clinic. Svoje praktické poznatky z diagnostiky a diétnej terapie chorôb zdieľa s odborníkmi na konferenciách, školeniach, v časopisoch a na webových stránkach. Zaujíma ju najmä vplyv moderného životného štýlu na molekulárne procesy v tele.

Kategórie:

Výskum